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抗萬(wàn)古霉素腸球菌（VRE）顯色培養(yǎng)基使用說(shuō)明書

法國(guó)科瑪嘉VRE顯色培養(yǎng)基

用于耐萬(wàn)古霉素糞腸球菌（E.faecalis）和尿腸球菌(E.faecium)的鑒定和計(jì)數(shù)。

【組分】

瓊脂                               15.0g/L

蛋白胨和酵母浸出物                 20.0 g/L

色素                               27.3 g/L

鹽類                               5.0 g/L

PH                                6.8±0.2

根據(jù)需要，可以進(jìn)行經(jīng)典配方的調(diào)整或補(bǔ)充。

【操作】

1. 稱取瓶?jī)?nèi)干粉67.3g，用1000ml蒸餾水或純水溶解，可以按照67.3 g/L的比例擴(kuò)大或 縮小。
2. 將上述干粉緩慢倒入蒸餾水中，充分?jǐn)嚢柚敝镰傊?溶解。
3. 加熱至100℃，并且不斷攪拌。如果使用高壓鍋，請(qǐng)不要加壓，加熱不能超過100℃。使用微波爐加熱時(shí)，在煮沸后立即移出微波爐并不斷攪拌，而后移入微波爐再加熱，直至*溶解（大氣泡代替泡沫產(chǎn)生，大約需要2分鐘）。
4. 把VRE基礎(chǔ)培養(yǎng)基冷卻至45－50℃?zhèn)溆?，此基礎(chǔ)培養(yǎng)基為乳白色。
5. 取增補(bǔ)劑一瓶，加入1ml 54%酒精溶解，以無(wú)菌操作把增補(bǔ)劑加入到備用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，輕輕混合均勻(使其終濃度為60mg/L)，避免氣泡，也可按照60mg/L的比例擴(kuò)大或縮小 。
6. 使用傾注程序：準(zhǔn)備直徑為90mm的已滅菌的帶蓋培養(yǎng)皿，每個(gè)培養(yǎng)基接種1ml樣品，然后傾注混合均勻的培養(yǎng)基 15±1ml，混合均勻使其凝固，倒置，37℃培養(yǎng)16小時(shí) ,24小時(shí) 和48小時(shí)，觀察結(jié)果 。
7. 如果使用表面接種程序：將培養(yǎng)基傾注于已滅菌的培養(yǎng)皿中（用前貯存于2－8℃，避光，接種前應(yīng)先恢復(fù)至室溫）。樣品劃線接種或者涂布接種于 培養(yǎng)基表面，在37℃培養(yǎng)18小時(shí)，24小時(shí)和48小時(shí)，觀察結(jié)果。

【貯存】

1、法國(guó)科瑪嘉VRE顯色培養(yǎng)基干粉需保存在15-30℃干燥環(huán)境中，增補(bǔ)劑保存于2－8℃環(huán)境下。

2、傾注好的培養(yǎng)基在室溫可保存一天，2－8℃冰箱中避光可以貯存兩星期。

【結(jié)果】

★ 極少數(shù)其他菌屬菌株如乳酸桿菌素可能呈現(xiàn)很小的紫色菌落。

★ 使用過的培養(yǎng)基需要在121℃滅菌至少20分鐘才可以按照有關(guān)規(guī)定丟棄。